細胞保種

【實(shí)驗材料】細胞、DMSO、0.25% Trypsin-EDTA（或細胞刮刀）、100 X雙抗、PBS、胎牛血清、DMEM 完-全培養基、75% 乙醇、胰酶、異丙醇；

【儀器與用品】?jì)龃婀堋?7度恒溫水浴鍋、培養皿（6 cm）、細胞凍存盒（已添加異丙醇）或凍存泡沫盒、記號筆、-80度冰箱、倒置相差顯微鏡、凍存管、37度恒溫水浴鍋、培養皿（6cm）、液氮罐、離心機、細胞房專(zhuān)用超凈臺、移液槍及移液槍頭（無(wú)菌或滅菌后烘干）、一次性細胞計數板、細胞自動(dòng)計數儀、培養箱、移液管。

1、液氮凍存不建議用國產(chǎn)凍存管，復蘇時(shí)容易爆管；

2、消化細胞時(shí)，不能過(guò)度消化；

3、DMSO溶于DMEM培養基會(huì )放熱，應提前5-10分鐘配置凍存液。用凍存盒時(shí)避免異丙醇將標記擦掉；

4、二甲基亞砜能穿透許多合成的或天然的膜，包括皮膚和橡膠手套。因此，應謹慎處理。將凍存管放入液氮時(shí)，必須使用保護性手套和面罩。

1、細胞消化過(guò)度，導致復蘇時(shí)細胞狀態(tài)不好；

2、負八十冰箱中長(cháng)期保存細胞效果不好，應及時(shí)將細胞轉移至液氮中；

3、國產(chǎn)凍存管在液氮中容易漏液氮，導致復蘇時(shí)曝管，所以放液氮中盡量使用質(zhì)量較好的凍存管。

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