單層生長(cháng)的細胞增殖，融合成片，并長(cháng)滿(mǎn)細胞瓶表面。有些細胞靠頻繁地換液可維持細胞在平臺期數天至數周；而許多其他細胞系需要胰蛋白酶處理、傳代培養后才能存活下來(lái)，用胰蛋酶處理可將細胞從生長(cháng)物表面分離下來(lái)以促進(jìn)傳代培養。后種細胞系不易呈現出接觸抑制并繼續增殖，達到極限后細胞則從細胞瓶表面脫落, 很難再彌散接種。

1) 下列步驟描述胰蛋白酶處理細胞的過(guò)程（見(jiàn)下文“胰蛋白酶處理分離細胞"）

2) 重懸細胞于培養液中。

在此時(shí)進(jìn)行細胞計數嚴好。若記錄傳代次數以識別細胞的生長(cháng)經(jīng)歷，可按方便傳代計劃的比例稀釋細胞

3) 分裝細胞懸液于含有合適 PH 的培養液的細胞培養瓶或培養皿中。

傳代細胞在貼壁和再次進(jìn)行代謝前的大約幾小時(shí)中不能自行調節 PH。傳代期是特別重要的時(shí)期.

培養液的 pH 和細胞培養瓶或培養皿氣相中的 CO2 含量應在接種細胞前平衡好。在細胞加人前將培養液加入培養瓶中，并將蓋子松松地蓋上，置培養箱中放罝 10~15 分鐘即可。

4) 在接受細胞的細胞培養瓶或培養皿中混勻細胞，將細胞懸液均勻鋪在容器表面、細胞貼壁通常笫 8~10 小時(shí)，人二倍體成纖維細胞經(jīng)常按以 1:4 比例，一周傳代一次。細胞倍增時(shí)間的估算可采用以下方法：即滿(mǎn)版細胞 1:2 比例傳代后再次鋪滿(mǎn)培養瓶的時(shí)間，或以 1:4 比例傳代兩次細胞倍增時(shí)間后細胞再次鋪滿(mǎn)。