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    細胞傷口愈合

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-16  點(diǎn)擊次數: 843次

    原理

    在單層培養細胞間制作劃痕以產(chǎn)生愈傷區域,然后監控該傷口周?chē)毎南騽澓圻w移的現象,即傷口愈合。改變細胞遷移和/或生長(cháng)的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量,適用于自動(dòng)化系統高通量篩選。

    材料與儀器

    人MDA-MB-231細胞
    DMEM培養基 胎牛血清 PBS 戊二醛 乙醇 結晶紫
    24孔培養板 槍頭 細胞培養儀

    步驟

    1.細胞在含有10%FBS的DMEM培養基中生長(cháng)。


    2.細胞以一定密度接種到24孔細胞培養板中,生長(cháng)24小時(shí)后,單層細胞融合度應達到70-80%。


    3.不要更換培養基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養細胞間劃痕,劃痕橫穿過(guò)孔,槍頭盡量與板孔的底部垂直,不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號的槍頭調節。劃痕在同一方向成一條直線(xiàn)。


    4.在垂直與第一條劃痕的方向制作另一條劃痕,每孔劃痕成十字交叉型。


    5.劃痕后,用培養基輕輕的清洗板孔2次,以去除脫落細胞。


    6.每孔添加新鮮培養基。


    7.(培養基中含有某些成分,如抑制/促進(jìn)細胞遷移和/或增殖的化學(xué)物質(zhì))


    8.細胞生長(cháng)48小時(shí)(或根據時(shí)間需要)。


    9. 1xPBS清洗細胞兩次,然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。


    10. 1%的結晶紫(2%乙醇溶解)染色30分鐘。

    注意事項

    為了降低實(shí)驗結果的可變性,建議每孔選擇多個(gè)視野觀(guān)察,每組做多個(gè)重復。

    常見(jiàn)問(wèn)題

    gap的距離可通過(guò)Photoshop或ImagJ軟件測量,為了降低實(shí)驗結果的可變性,建議每孔選擇多個(gè)視野觀(guān)察,每組做多個(gè)重復。


    以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

     

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    安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉染、大規模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶(hù),提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細胞培養規模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專(zhuān)注為生物醫藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。

     

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