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    馬松染色的實(shí)驗步驟和注意事項

    發(fā)布時(shí)間: 2024-04-01  點(diǎn)擊次數: 998次

    馬松(Masson)染色是一種用于可視化組織纖維和炎性因子的染色方法。該技術(shù)充分利用了不同組織成分對陰離子燃料滲透性的差異。此法多用于觀(guān)察病變組織中纖維結締組織的增生和分布,纖維素腫瘤與肌源性腫瘤的鑒別,在肌肉疾病和心血管疾病的診斷中具有重要意義。


    一、原理:

    Masson染色,又成為馬松染色,是結締組織染色領(lǐng)域中經(jīng)典的一種技術(shù)方法,專(zhuān)注于膠原纖維的染色。該方法被廣泛應用于組織學(xué)研究中,其主要目的是對胞核進(jìn)行染色,并能夠有選擇地展示膠原纖維和肌纖維。


    Masson染色的原理與陰離子染料分子的大小以及對組織的滲透性密切相關(guān):分子的大小由其分子量決定,小分子量的染料能夠輕松穿透結構致密、滲透性低的組織,而大分子量則僅能進(jìn)入結構疏松、滲透性較高的組織。然而,由于淡綠或苯胺藍的分子量較大,因此Masson染色后,肌纖維呈現紅色,而膠原纖維呈綠色或藍色,主要用于區分這兩者。


    圖片
    對石蠟包埋的大鼠氣道切片進(jìn)行Masson染色
    材料準備:4%甲醛固定液、二甲苯(AR級)、無(wú)水乙醇(AR級)、蘇木素染色液、鹽酸(AR級)、麗春紅、酸性品紅、磷鉬酸、苯胺藍、乙酸、中性樹(shù)膠

    二、實(shí)驗步驟:
    1、石蠟切片脫蠟至水:將切片依次置于二甲苯Ⅰ中浸泡20分鐘,二甲苯Ⅱ中浸泡20分鐘,無(wú)水乙醇Ⅰ中浸泡10分鐘,無(wú)水乙醇Ⅱ中浸泡10分鐘,95%酒精中浸泡5分鐘,90%酒精中浸泡5分鐘,80%酒精中浸泡5分鐘,70%酒精中浸泡5分鐘,最后進(jìn)行蒸餾水洗。

    2、對細胞核進(jìn)行蘇鐵蘇木素染色:將切片浸入蘇鐵蘇木素染液中染色3-8分鐘,然后進(jìn)行流水沖洗。

    3、利用麗春紅-酸性品紅染色:將切片置于麗春紅-酸性品紅染液中進(jìn)行染色5分鐘,然后使用0.2%冰醋酸進(jìn)行沖洗。

    4、磷鉬酸分化:將切片放入磷鉬酸中進(jìn)行分化數秒,然后進(jìn)行水洗。

    5、苯胺藍染色:將切片放入苯胺藍染液中進(jìn)行染色5分鐘,然后使用0.2%冰醋酸進(jìn)行沖洗。

    6、快速脫水和透明化:按照以下步驟進(jìn)行脫水和透明化:依次將切片放入95%酒精Ⅰ中浸泡5分鐘,95%酒精Ⅱ中浸泡5分鐘,無(wú)水乙醇Ⅰ中浸泡5分鐘,無(wú)水乙醇Ⅱ中浸泡5分鐘,二甲苯Ⅰ中浸泡5分鐘,二甲苯Ⅱ中浸泡5分鐘,然后將切片從二甲苯中取出稍事晾干,最后使用中性樹(shù)膠封片。

    7、鏡檢,并進(jìn)行圖像采集和分析。

    三、Masson染色實(shí)驗注意事項
    1、嚴格掌握染色步驟,特別是在每個(gè)步驟之間進(jìn)行充分洗滌是至關(guān)重要的。這有助于防止前一步驟的染料殘留對下一步染色產(chǎn)生影響。

    2、組織的有效固定在染色過(guò)程中發(fā)揮著(zhù)至關(guān)重要的作用。根據使用不同固定液的情況,可以靈活調整染色時(shí)間,以實(shí)現最佳染色效果。

    3、使用0.2%冰醋酸水溶液進(jìn)行洗滌,有助于產(chǎn)生清晰鮮艷的色調。

    4、注意避免過(guò)度干燥:在染色過(guò)程結束后,務(wù)必防止樣本的過(guò)度干燥,以避免產(chǎn)生偽影。

    5、苯胺藍和麗春紅要充分溶解然后過(guò)濾使用,不過(guò)濾的染液里面雜質(zhì)過(guò)多,會(huì )阻礙染液和組織的結合緊密程度。

    6、磷鉬酸水溶液對麗春紅和酸性復紅具有分化作用。在分化過(guò)程中,通過(guò)鏡下仔細控制,可以觀(guān)察到肌纖維和纖維素呈現紅色,而膠原纖維呈淡粉紅色即可。


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