細胞的體外培養需要依附在人工附著(zhù)物上，大多數脊椎動(dòng)物細胞在人工附著(zhù)物上會(huì )呈現為單層生長(cháng)的狀態(tài)。

所謂的人工附著(zhù)物，就是常見(jiàn)的多孔板、培養瓶、培養皿。

用什么類(lèi)型的附著(zhù)物來(lái)培養細胞，是有什么依據的呢？這一期內容就講講這個(gè)話(huà)題。

基本概念

從材料分類(lèi)上看，常見(jiàn)的細胞培養附著(zhù)物分為一次性的塑料和玻璃。

先說(shuō)玻璃，成本低、可重復使用，透光性好，但由于其清洗過(guò)程復雜，不易保存，現在已逐漸被一次性塑料取代了。

一次性塑料的主要成份是聚丙乙烯，由人工合成，質(zhì)地均勻，產(chǎn)量大成本低，能為細胞提供一個(gè)良好的生長(cháng)表面。

這里有一個(gè)小細節，有的塑料培養器皿會(huì )標注“已表面處理“，這是什么意思呢？

因為聚丙乙烯生產(chǎn)好以后，其表面是疏水性的，這不利于細胞貼壁生長(cháng)，因此，需要進(jìn)行特殊的工藝處理，例如射線(xiàn)照射、電離輻射，這樣處理過(guò)的表面細胞才能更好的貼在上面生長(cháng)。

選擇器皿的原則

選擇用多孔板培養細胞還是培養瓶培養細胞，是根據你培養細胞的目的來(lái)決定的。

如果培養細胞的目的是通過(guò)細胞倍增，最終獲得大量細胞或細胞分泌物，則應該使用培養皿、培養瓶來(lái)培養細胞。

如果目的是為了進(jìn)行微量的、多次的重復實(shí)驗來(lái)分析細胞或細胞產(chǎn)物，則應該使用多孔板來(lái)培養。

確定培養目的以后，應該根據具體情況選擇不同規格的器皿。以下分類(lèi)說(shuō)明。

1 選擇培養瓶、培養皿培養細胞

首先，根據期望獲得的細胞產(chǎn)量來(lái)選擇，培養瓶是通過(guò)表面積來(lái)命名的，例如T25、T75、T175，數字就是表面積，25就是25cm2，如此類(lèi)推；

培養皿是按照其直徑來(lái)命名的，例如3.5cm、9cm。以下，是按照不同規格的培養器皿所能培養的細胞數量繪制的參考圖，有興趣的同學(xué)可以保存下來(lái)以后用。

其次，根據實(shí)驗操作熟練程度來(lái)選擇，培養皿的操作比較方便，不管是換液、傳代、還是收獲細胞，但因為其開(kāi)口很大，所以容易污染，如果你是新手，不建議直接用培養皿養細胞。

最后，如果選擇培養瓶培養，還應該盡量選擇有斜肩設計、帶透氣孔瓶蓋的型號。

前者可以避免培養瓶平放后，過(guò)多的培養基接觸瓶蓋造成污染，后者可以保持內外的二氧化碳濃度一致。

如果瓶蓋不透氣，那在放進(jìn)培養箱時(shí)，應擰松一圈，以便內外氣體能順利交換。

2 選擇多孔板培養細胞

首先，也是要判斷你的實(shí)驗需要多少細胞來(lái)進(jìn)行分析，以此來(lái)選擇多孔板的規格。大家同樣可以參照上面的圖表。

有極個(gè)別的孔板，孔底部是錐形底或圓底，這種規格的多孔板適用于非組織型的細胞培養，對于大多數貼壁生長(cháng)的細胞來(lái)說(shuō)不適合。

選擇好合適的孔板后，在培養階段，有2點(diǎn)注意事項：

A 多孔板會(huì )帶板蓋，但其密封性不好，在培養箱內會(huì )造成邊緣的孔位蒸發(fā)效率過(guò)高，進(jìn)而影響細胞生長(cháng)速率。

有條件的同學(xué)，可以在蓋上板蓋后在縫隙處貼一圈封口膜?；蛘呱釛夁吘壙孜?，并采用添加培養基來(lái)代替。

B 當細胞種入孔內以后，不應該再進(jìn)行過(guò)多的震動(dòng)，例如晃動(dòng)、抖動(dòng)培養板，而應該輕緩的放入培養箱中。

如果培養箱由多人共用，還應該考慮大家頻繁開(kāi)關(guān)箱門(mén)、拿放孔板造成的震動(dòng)，這些不利因素都應該盡量減少。

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