支原體是什么？如何判斷細胞是否被支原體感染？如果感染了，細胞應該如何處理？

以上三個(gè)問(wèn)題，大多數養細胞的同學(xué)都會(huì )遇到，我們今天就講一下支原體污染的問(wèn)題。

支原體，是一種沒(méi)有細胞壁結構，在獨立生活和細胞內寄生之間存活的原核生物，其結構和典型的細菌相近。

部分支原體可以致病，例如肺部支原體。由于支原體沒(méi)有細胞壁，許多常見(jiàn)的抗生素，如青霉素對其沒(méi)有殺傷力。

和常見(jiàn)的細菌污染不同，細胞被支原體污染后，采用常規顯微鏡無(wú)法直接在明場(chǎng)視野下看到支原體，后者也并不會(huì )直接破壞宿主細胞結構，而是改變細胞的代謝。

所以，細胞往往表現出生長(cháng)狀態(tài)變差，例如生長(cháng)緩慢，不像細菌污染那樣大量死亡。因此，被支原體污染的細胞是很難察覺(jué)出異樣的。

那么，如何判斷細胞是否被支原體污染呢？

常用的方法有熒光染色、PCR、ELISA、免疫染色、放射自顯影以及微生物學(xué)分析。

對于大多數同學(xué)而言，最簡(jiǎn)的辦法，應該是采用熒光染色。具體來(lái)說(shuō)，就是使用Hoechst 33258對細胞進(jìn)行染色。

其原理是被染色后的細胞，在50X或100X目鏡下觀(guān)察，可以看到細胞核呈藍色熒光，細胞內染色質(zhì)上有明確的藍色熒光微?；蚪z狀物，后者就是支原體的標志特征。

動(dòng)物細胞培養 第7版 配圖

使用Hoechst 33258進(jìn)行染色的實(shí)驗方法見(jiàn)下圖（參考資料：動(dòng)物細胞培養 第7版）。

如果實(shí)驗室有條件的同學(xué)，也可以直接購買(mǎi)商業(yè)化的檢測試劑盒，這樣會(huì )更加方便和高效。

我們之前講過(guò)，如果細胞被微生物污染，例如細菌，那么應該直接把被污染的細胞清理掉，而不是嘗試挽救。

同理，當細胞被確認感染了支原體后，第一選擇的處理措施依然也是清理掉污染的細胞。

除非該細胞非常重要，或無(wú)法替代，此時(shí)我們可以嘗試去除支原體污染。以下，我們也為大家分享支原體清除的實(shí)驗操作建議。（參考資料：動(dòng)物細胞培養 第7版）

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