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發(fā)布時(shí)間： 2021-11-05 點(diǎn)擊次數： 2226次無(wú)血清凍存液可即開(kāi)即用，方便省時(shí)。無(wú)血清成分，化學(xué)成分明確?？焖倮鋬?，可直接置于-80℃冰箱冷凍。高復蘇活率，有效保護細胞。無(wú)血清凍存液的一般凍存步驟如下：1.選擇處于對數生長(cháng)期的細胞，在凍存前一天最好換液。將多個(gè)培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。2.去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為3×106-1×107/mL之間。3.將上述細胞分裝于安瓿或專(zhuān)用冷凍塑料管中，安瓿裝1-1.5mL在火焰噴燈上封口，封口處要*封閉，圓滑無(wú)勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱(chēng)和凍存日期，同時(shí)作好登記（日期、細胞種類(lèi)及代次、凍存支數）。4.將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內；置于液氮容器頸口處存放過(guò)夜，次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入4℃冰箱中2-3小時(shí)，再移至冰箱冷凍室內3-4小時(shí)（此步可省略），再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí)，最后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長(cháng)期保存，但為妥善起見(jiàn)，凍存半年后，最好取出一只安瓿細胞復蘇培養，觀(guān)察生長(cháng)情況，然后再繼續凍存。
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