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    探討無(wú)血清培養基的一些主要補充因子

    發(fā)布時(shí)間: 2022-11-07  點(diǎn)擊次數: 950次
       無(wú)血清培養基是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長(cháng)時(shí)間生長(cháng)繁殖的合成培養基。但它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的全培養基可以滿(mǎn)足大部分細胞培養的要求,但對有些實(shí)驗卻不適合,如觀(guān)察一種生長(cháng)因子對某種細胞的作用,這時(shí)需要排除其他生長(cháng)因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長(cháng)因子;又如需要測定某種細胞在培養過(guò)程中分泌某種物質(zhì)(抗體、生長(cháng)因子)的能力;或者要大規模的培養某種細胞,以獲得它們的分泌產(chǎn)物。因此研制出無(wú)血清培養基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標。
      補充因子是代替血清的各種因子的總稱(chēng)。多數無(wú)血清培養液必須補加3-8種因子。胰島素和轉鐵蛋白是必須補充因子,其他多數為輔助作用的因子。按其功能不同,補充因子可分為以下五類(lèi):
      1.激素和生長(cháng)因子
      很多細胞用無(wú)血清培養時(shí)需要加?激素,如胰島素、生長(cháng)激素、胰?糖素等。胰島素是重要的細胞存活因子,與細胞上的胰島素受體結合后可促進(jìn)RNA、蛋白質(zhì)和脂肪酸的合成,抑制細胞凋亡。此外,雌?醇、孕酮等也是無(wú)血清培養基中常添加的補充因子。
      2.結合蛋白
      常見(jiàn)如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。轉鐵蛋白與細胞上的轉鐵蛋白受體結合是細胞獲取鐵元素的主要來(lái)源。白蛋白與脂類(lèi)、激素、維生素、?屬離子和生長(cháng)因子結合后可調節上述物質(zhì)在無(wú)血清培養基中活性的作用,此外,由于牛血清白蛋白?般添加量比較大,可增加培養基的粘度,保護細胞免受機械損傷。
      3.貼壁因子
      許多細胞必須貼壁才能生長(cháng),這種情況下無(wú)血清培養基中?定要添加促貼壁和擴展因子,?般為細胞外基質(zhì),如纖粘連蛋白、膠原蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著(zhù)重要作用。纖粘連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、CHO細胞、成肌細胞、CHO細胞等。
      4.酶抑制劑
      培養貼壁生長(cháng)的細胞,需要用胰酶消化傳代,在無(wú)血清培養基中不可少須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達到保護細胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。
      5.其他補充因子
      ?些細胞培養使用的無(wú)血清培養基還需要補充微量元素、維生素、脂類(lèi)等低分子量物質(zhì)。
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