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發(fā)布時(shí)間： 2022-12-09 點(diǎn)擊次數： 1173次zeta life轉染試劑用于將DNA和siRNA轉染到真核細胞系和各種原代細胞中，可轉染極度難轉染的免疫細胞、懸浮細胞，如:T細胞、NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等，可高效率轉染siRNA到任何哺乳動(dòng)物細胞。使用zeta life轉染試劑過(guò)程要注意以下幾點(diǎn)：1.細胞密度：轉染質(zhì)粒時(shí)，細胞密度為80-100%，轉染RNA(siRNA或miRNA)時(shí)，細胞密度為60-80%，具體細胞密度必須結合考慮核酸種類(lèi)、轉染試劑種類(lèi)和細胞生長(cháng)密度極限。2.RNA用量：10-30 pmol/孔（以24孔板為例），具體用量根據轉染效率檢測實(shí)驗確定。3.試劑用量：轉染試劑說(shuō)明書(shū)推薦了一個(gè)使用范圍，具體用量根據轉染效率檢測實(shí)驗確定。4.根據轉染效率檢測實(shí)驗確定核酸的用量及轉染試劑的用量（核酸與轉染試劑的比例關(guān)系），轉染效率檢測實(shí)驗一般在24孔板中進(jìn)行，其他格式的培養器皿請根據底面積的比例進(jìn)行計算。5.轉染試劑使用前才從4℃中取出，取用前，先短暫離心，然后放在渦旋振蕩器上點(diǎn)動(dòng)混勻三次，每次持續1秒，混勻后短暫離心，上述措施是為了混勻轉染試劑，保證使用效果，使用后立即放回4℃保存。6.核酸和轉染試劑分別用Opti-MEM稀釋?zhuān)♂尩暮怂峥梢酝ㄟ^(guò)彈勻，吹打均勻，顛倒混勻或渦旋點(diǎn)動(dòng)混勻，稀釋的轉染試劑可以通過(guò)彈勻，顛倒混勻或渦旋點(diǎn)動(dòng)混勻，不可使用吹打均勻；混勻后均需短暫離心。7.把稀釋的核酸和稀釋的轉染試劑復合混勻時(shí)，應該把稀釋的核酸加入稀釋的轉染試劑中（順序不可調轉）；加入后立即進(jìn)行（不要耽擱）彈勻或顛倒混勻，先不進(jìn)行短暫離心，待所有的管子復合完畢后，在一起進(jìn)行渦旋點(diǎn)動(dòng)混勻三次，每次持續1秒，然后短暫離心。8.轉染復合物孵育形成時(shí)盡量避光室溫或37℃放置。9.進(jìn)行RNA轉染時(shí)，盡量使用無(wú)酶及滅菌處理的耗材。
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