細胞侵襲實(shí)驗3D基質(zhì)膠

應用：

•3D 細胞球體培養 

•小鼠皮下成瘤 

•細胞侵襲 

•適合用于 3D 細胞藥物篩檢平臺 

•細胞生長(cháng)和分化 

•代謝/毒理學(xué)研究

樣本類(lèi)型： 

•腫瘤細胞系、哺乳動(dòng)物組織

試劑盒組分

細胞侵襲實(shí)驗準備程序 

A、試劑準備: 

1、C 緩沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使用 37 ℃水浴回溫的無(wú)血清細胞培養液 (例如: 無(wú)血清 DMEM 等，用于 稀釋 A 膠) 稀釋 C 緩沖溶液 (10 X) (貨號: B-P-00002-C)至 C 緩沖溶液 (0.5 X), 即體積稀釋 20 倍。使 用前放置 37 度水浴槽。 (例如:1 mL C 緩沖溶液 (10 X) + 19 ml 無(wú)血清 DMEM; 如未使用完畢，可保存 于 4 ℃ 冰箱, 保存一周) 

2、A 膠 (1X) 制備 : 將 A 膠 (2X) (貨號: B-P-00002-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認*溶解。 再將 37 ℃水浴回溫的無(wú)血清細胞培養液取 0.5 mL，加至 37 ℃已溶解的 0.5 mL A 膠 (2X)，配置成 1 mL 的 A 膠 (1X)。使用前置于 37 度，可降低 A 膠黏度。(單次使用，勿重復冷凍解凍 A 膠 (1X) ) 

B、細胞侵襲實(shí)驗步驟 

1、準備適用 24 孔板的 Transwell 裝置(例如:康寧 Transwell insert, 8 μm PET membrane)。 

2、用 37 ℃已回溫的 C 緩沖溶液 (0.5 X)將 A 膠 (1X) 原液體積稀釋 5-20 倍，建議一開(kāi)始可選用 15 倍。 (根據細胞種類(lèi)做稀釋比例對比實(shí)驗，找出最為適合自己實(shí)驗體系的稀釋倍數，稀釋倍數越高，膠體越軟，越 容易穿透) 

3、根據 Transwell 上室底部面積加入步驟 2 的 0.1 mL 稀釋后的 A 膠稀釋液到 Transwell 上室中。 

4、將步驟 4 在 4 ℃ 冰箱孵育 2-3 小時(shí)。 

5、在 Transwell 上室中加入 0.1 mL 無(wú)血清的細胞懸液，使細胞最終濃度約 7.5 x 104 cells/well.。 

6、在 Transwell 下室中加入 0.8 mL 含 10 %血清的細胞培養液做為 chemoattractant，吸引細胞進(jìn)行遷 移及分泌基質(zhì)蛋白酶 (MMP) 侵襲。 (對照組為 Transwell 下室中加入含 0.8ml 無(wú)血清的細胞培養液)。 

7、將細胞培養板在 37 ℃, 5 % CO2 培養箱孵育 24-48 小時(shí)。 

8、移除培養液，以 PBS 清洗 2 次。 

9、用棉簽輕輕擦掉上層未遷移的細胞。 

10、加入 1 ml 100 % 甲醇室溫固定 30 分鐘,再以 PBS 清洗 2 次。 

11、加入 1 ml 0.1 % 結晶紫染液 ( 0.1 % (g/ml) PBS 結晶紫) 室溫染色 20 分鐘，再以 PBS 清洗 2 次。 

12、將 Transwell 移至載玻片上，在顯微鏡下隨機 6-9 個(gè)視野觀(guān)察計算遷移的細胞數。

細胞侵襲實(shí)驗3D基質(zhì)膠特點(diǎn)：

1、100%植物源材料，無(wú)任何動(dòng)物成分；

2、氨基酸序列100%人源化 ；

3、可調控基質(zhì)膠硬度進(jìn)行多種細胞培養；

4、3D培養結束后基質(zhì)膠可以溫和融化，并保留3D細胞/類(lèi)器官結構完整性；

5、3D細胞/類(lèi)器官培養種類(lèi)數量范圍更廣

6、無(wú)人畜共通病原菌或毒素風(fēng)險；

7、最為適用于醫療級生物原料；

8、高活性、高純度、可融化；

9、4度運輸、4度保存；

10、2年保存時(shí)間。

B-P-00002系列基質(zhì)膠可替代corning基質(zhì)膠貨號：356234、356235、356237、356230、356231、354248、354263

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