現已被廣泛用于免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、微生物學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。典型的應用實(shí)例包括血液系統疾病的免疫分型，腫瘤學(xué)中細胞 DNA 的倍體和周期分析，細胞生物學(xué)研究中的細胞凋亡、增殖，細胞表面或胞內的抗原檢測等。

其中，流式技術(shù)較為廣泛的應用是使用流式抗體進(jìn)行細胞的分型鑒定，常見(jiàn)的免疫表型分析實(shí)驗包括單細胞懸液制備、細胞表面或胞內抗體的染色、上機檢測等基本步驟。

直接法：熒光標記的抗體直接與細胞的抗原結合，一步孵育后即可以進(jìn)行細胞的流式上機檢測。直接法因為其方便快捷，交叉反應和背景少，是目前主流的流式標記手段。

間接法：細胞先與一抗進(jìn)行孵育，然后熒光二抗再結合到一抗上形成免疫檢測復合物，后續即可以進(jìn)行上機。當商品化的直標抗體無(wú)法獲得時(shí)，間接法可以作為補充，但間接法在多色實(shí)驗中很難避免種屬間的交叉反應，選擇性會(huì )大大受到影響。

兩種流式細胞標記法原理見(jiàn)圖 1。

圖 1 流式抗體標記常見(jiàn)的兩種形式

（左圖為直接法，右圖為間接法）

除選擇上述兩種商品化標記抗體外，還可使用抗體標記試劑盒標記抗體，獲取實(shí)驗所需的熒光標記抗體，但該方法對技術(shù)要求高，標記效果往往受多種因素影響。常見(jiàn)的傳統流式細胞標記方法，見(jiàn)表 1。

表 1 常見(jiàn)的傳統流式細胞標記方法

隨著(zhù)流式細胞儀、單克隆抗體和熒光探針的不斷發(fā)展，流式分析已經(jīng)從早期的單激光單色檢測，發(fā)展到可快速同時(shí)定量檢測一種細胞的多種特性，多色多參數多激光的檢測分析。

同時(shí)分析多個(gè)抗原或多種細胞特性的能力為越來(lái)越復雜的實(shí)驗打開(kāi)了新的大門(mén)，但多色流式細胞分析需要平衡多個(gè)難題的解法，包括儀器配置、抗原表達和染料亮度，以及可用的抗體- 染料組合等，考慮的要素見(jiàn)圖 2。

圖 2 流式多色方案設計需要考慮的要素

流式的配色需要綜合考慮以下因素：

如果研究人員無(wú)法在一次實(shí)驗中妥善調和上述因素，就需要退而求其次，進(jìn)行多次分析。而多次分析難免引入各不相同的實(shí)驗條件，由此造成的數據波動(dòng)最終會(huì )導致數據結果不可靠。

ColorWheel^® 流式抗體和染料組合采用專(zhuān)為流式細胞術(shù)優(yōu)化的專(zhuān)（禾刂）技術(shù)，支持用戶(hù)分別選擇抗體和染料并根據自身需要任意組合，在保證實(shí)驗成功率的同時(shí)又可幫助簡(jiǎn)化流式細胞分析流程，突破傳統流式分析方案的局限。

主要優(yōu)勢：

ColorWheel^® 技術(shù)基于專(zhuān)（禾刂）的寡核苷酸配對連接技術(shù)將抗體與染料偶聯(lián)起來(lái)（詳見(jiàn)圖 3），偶聯(lián)產(chǎn)物與熒光標記的直標抗體保持一致，可以直接用于流式的標記檢測。該技術(shù)的偶聯(lián)過(guò)程只需要簡(jiǎn)單的 1:1 的混合，其偶聯(lián)過(guò)程比起傳統的抗體標記方法大大簡(jiǎn)化。ColorWheel^® 流式抗體的選擇靈活性能讓使用者更加靈活的設計多色方案，擺脫由于抗體熒光組合缺失導致的配色困境（詳見(jiàn)表 2）。

圖 3  ColorWheel 流式抗體偶聯(lián)技術(shù)示意

表 2 Colorwheel^® 助力突破傳統多色流式分析的局限

應用舉例：

ColorWheel^® 不僅可以簡(jiǎn)化流式細胞分析流程，突破傳統流式分析方案的局限，同時(shí)可以保證在多重指標的流式實(shí)驗中具有優(yōu)異的表現。

以下實(shí)驗檢測了免疫 T 細胞檢測常用的指標 CD3，CD4，CD44，CD45RA，該 4 重指標的實(shí)驗用來(lái)評估 CD4+ 輔助型T細胞的激活狀態(tài)。結果顯示，ColorWheel^® 流式抗體與傳統的流式抗體具有同樣優(yōu)異的表現（詳見(jiàn)圖 4）。

圖 4 ColorWheel 流式抗體與傳統流式抗體的檢測效果比較（左邊是 ColorWheel^® 結果，右邊是傳統數據）