細胞轉染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術(shù)。其在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等實(shí)驗和應用中使用越來(lái)越廣泛。然而，轉染效率低下卻一直是科研工作者們經(jīng)常遇到的一大難題。尤其是原代細胞轉染，更是因為難度大，效率低從而使得科研人員們頭痛不已，談“轉染"色變······

這里，小編根據收集做細胞轉染多年的經(jīng)驗和體會(huì )，總結出了以下導致細胞轉染效率低下，經(jīng)?！胺?chē)"的大坑，以及避免掉坑里的一些做法。

影響細胞轉染效率的因素, 轉染中經(jīng)常翻車(chē)的點(diǎn)

影響轉染效率的因素有很多，細胞株本身的特性和活性，細胞培養條件，轉染的DNA 或RNA 的質(zhì)量， 轉染方法，轉染試劑的選擇等。

一、準備不充分、轉染條件不佳

一般情況下，做細胞轉染時(shí)除了必要的試劑、細胞和DNA等要準備充分外，實(shí)驗的條件和操作步驟要求等都應該嚴格遵守。比如：脂質(zhì)體的用量、DNA濃度、細胞密度、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時(shí)間等。只有避免這些人為因素導致的低級錯誤才能更好地分析提高轉染效率的方法。

二、細胞問(wèn)題：狀態(tài)不好、污染等

對于細胞轉染實(shí)驗，細胞自然是其中較為重要的實(shí)驗材料之一。在實(shí)驗室時(shí)，每次細胞轉染之前都要檢查細胞狀態(tài)和細胞密度是否合適。一般進(jìn)行轉染的細胞應該是在對數生長(cháng)期，如果不合適或細胞狀態(tài)太差，那寧可晚幾天做轉染，也不能盲目地去做實(shí)驗。否則只會(huì )偷雞不成蝕把米，大大影響后續的實(shí)驗結果。

三、轉染的DNA質(zhì)量不好：濃度太低、克隆不對等

當我們在做細胞轉染實(shí)驗時(shí)，需要轉染的質(zhì)粒DNA的質(zhì)量也是影響轉染效率的一大因素。如果DNA的濃度太低、純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質(zhì)，也會(huì )導致我們轉染效率低下甚至失敗。此外值得注意的是，實(shí)驗中常常需要轉染的并不是質(zhì)粒DNA，而是RNA。對于轉染RNA而言，我們一般推薦Zeta Life公司Advanced系列轉染試劑，它的優(yōu)勢是市面上所有的RNA ，Zeta Life 公司Advanced系列轉染試劑都可以轉染。這是一種采用的是新型小分子多肽材料，其特點(diǎn)是非脂質(zhì)體材料，可通過(guò)細胞主動(dòng)吞噬吸收進(jìn)入細胞，進(jìn)入細胞后可以被代謝。之所以選擇這一款產(chǎn)品，主要是由于其具有超高的轉染效率，對細胞無(wú)內毒素影響，不易出現細胞死亡，易于優(yōu)化，具有出色的轉染效率，適用細胞種類(lèi)多，以及簡(jiǎn)單快速的實(shí)驗方案等優(yōu)點(diǎn)。

實(shí)驗過(guò)程中，只需在細胞融合度為在60%-80%時(shí)進(jìn)行細胞轉染，質(zhì)粒DNA（或RNA）與轉染試劑直接1：1混合，無(wú)需分別稀釋再混合。全程使用含血清的*培養基，不需要轉染前后兩次更換培養基。使用簡(jiǎn)單、快速且具有很高的轉染效率。

四、細胞本身轉染困難

對于細胞本身轉染困難這個(gè)問(wèn)題，就并非人為原因了，細胞類(lèi)型的不同相應的轉染效率也會(huì )差很多。尤其是對于最難轉染的干細胞，就更是令大家伙頭疼，甚至讓大家聞之色變。但是，屏幕前的讀者可能想不到，其實(shí)對于很多有經(jīng)驗的科研人員來(lái)說(shuō)，在多能干細胞(PSC)和神經(jīng)干細胞(NSC)這些細胞中，照樣能獲得高達80%或更高的轉染效率，在間充質(zhì)干細胞(MSC)中獲得高達45%的轉染效率。至于他們是如何做到如此優(yōu)秀的？用的就是Zeta Life公司Advanced系列轉染試劑。各種細胞類(lèi)型中最高的轉染效率?？捎糜诙喾N真核細胞系的DNA轉染、siRNA轉染和共轉染；可用于各種原代細胞的DNA轉染、siRNA轉染；可轉染極度難轉染的免疫細胞、懸浮細胞、原代細胞、干細胞等。

五、轉染試劑選擇不對

轉染試劑的好壞，直接影響了細胞轉染實(shí)驗的成敗。如果，你對于現今市面上復雜的轉染試劑還不了解，那么這款Advanced DNA RNA Transfection Reagent就是你的*！

Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉染試劑采用中新型小分子多肽材料，包含了較為*的小分子材料轉染技術(shù)，能夠提供高效的轉染性能，改善相關(guān)應用的結果及可重復性。此試劑可將轉染效率提升數倍，并可改善細胞活性，廣泛適用于難轉染的及常見(jiàn)的細胞類(lèi)型（例如RAW264.7細胞和THP-1細胞）。

1、有效轉染難于轉染的細胞

Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉染試劑專(zhuān)門(mén)針對難轉染的細胞種類(lèi)進(jìn)行了優(yōu)化，能夠為廣泛的細胞種類(lèi)提供突出的轉染性能。即使是在原代細胞和干細胞等難轉細胞中，也能實(shí)現高效轉染。

2、助力癌癥研究

使用與癌癥相關(guān)的細胞系得到與您研究的問(wèn)題相關(guān)的答案。憑借更廣的適用細胞類(lèi)型、更高的轉染效率，Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉染試劑讓您能夠靈活選擇研究所用的細胞系。

3、在低毒條件下獲得優(yōu)異的轉染效率

Advanced DNA RNA Transfection Reagent的多肽小分子用量在很寬的動(dòng)態(tài)范圍內均能保持很高的轉染效率，可按需進(jìn)行簡(jiǎn)便快速的條件優(yōu)化。在需要將細胞損傷降到至低的相關(guān)應用中。

4、在新型基因組編輯的相關(guān)應用中獲得高轉染效率

Advanced DNA RNA Transfection Reagent適用于新型基因組編輯的相關(guān)應用。通過(guò)高效率的轉染，它能夠增加TALEN或CRISPR系統剪切和重組的成功概率，最終使得基因修飾的效率實(shí)現，并簡(jiǎn)化后續處理步驟。

與傳統脂質(zhì)體轉染試劑的效果比較： 

以上說(shuō)了這么多，也給大家安利了一些實(shí)用的產(chǎn)品，相信大家對于如何提高細胞轉染效率也更加有了信心。